Western Blot Analizi
Laboratuvar araştırmalarınızda güvenilir sonuçlar elde etmek için en etkili yöntemlerden biri olan Western blot, proteinlerin tespit ve analizinde altın standarttır. Deneyimli ekibimiz, son teknoloji ekipmanlarımızla (Thermo Fischer Scientific) yüksek hassasiyetle proteinleri ayırır, transfer eder ve özel antikorlarla tespit eder. Western blot hizmetimiz yüksek standartlarda gerçekleştirilerek, hızlı ve doğru sonuçlar sunar. Kapsamlı hizmetimiz sayesinde elde ettiğiniz güvenilir verilerle ister akademik araştırmalarınız ister endüstriyel projeleriniz / biyomedikal araştırmalarınız olsun çalışmalarınıza değer katıyoruz Ayrıca, sonuçlarınıza kolayca erişebileceğiniz kullanıcı dostu bir arayüz sunuyoruz. Bu sayede, analiz verilerinizi hızlı ve etkili bir şekilde inceleyebilir, araştırma süreçlerinizi daha verimli hale getirebilirsiniz. Western blot hizmetimizle, bilimsel başarılarınızı bir adım öteye taşıyın.
Western blot, hücre lizatı veya doku homojenatı gibi karmaşık bir protein karışımından hedef proteinleri saptamak ve tanımlamak için yaygın olarak kullanılan bir moleküler biyoloji yöntemdir. Yüksek hassasiyeti ve güvenilirliği sayesinde, temel biyolojik araştırmalardan biyomedikal araştırmalara kadar çeşitli alanlarda geniş bir kullanım yelpazesine sahiptir. Bu yöntem kanser araştırmalarında tümör biyomarkerlarının tespitinden farklı hücresel koşullarda protein seviyelerinin karşılaştırılmasına, protein-protein etkileşimlerinin, sinyal iletim yollarının ve post-translasyonel modifikasyonların incelemesinden, ilaç etkilerinin değerlendirilmesine kadar birçok farklı alanda kullanılmaktadır. Bu alanlar, Western blot’un biyomedikal araştırmalardaki önemini ve çok yönlülüğünü göstermektedir. Proje yürütücüsü tüm çalışma boyunca laboratuvarımızda deney aşamalarını gözlemleyebilmektedir.
Western blot tekniği 5 temel aşamadan oluşmaktadır,
- Örneklerin Hazırlanması; in vitro (hücre kültürü gibi) veya in vivo (deney hayvanı çalışmaları) deneyler gerçekleştirildikten sonra, dokudaki hücreler veya kültür hücreleri parçalanarak proteinleri içeren fraksiyonlar, diğer bileşenlerden ayrıştırılır. Bu aşamada, elde edilen protein karışımının konsantrasyonu spektrofotometrik yöntemle belirlenir. Bu adımın titizlikle uygulanması, Western blot deneyinin her bir kuyucuğuna eşit miktarda protein yüklememizi sağlar. Böylece, sonuçların karşılaştırılabilirliği ve analizin güvenilirliği artırılır. Örnek hazırlama süreci, Western blot analizi için kritik bir aşamadır. Bu adımların titizlikle uygulanması, elde edilen sonuçların güvenilirliğini artırır ve proteinlerin doğru bir şekilde tespit edilmesini sağlar.
- Proteinleri Ayrıştırma ve Transfer; ilk aşamada karışım halinde bulunan proteinler SDS-PAGE yöntemi kullanılarak elektroforez cihazında moleküler ağırlıklarına göre ayrıştırılır ve jelde fazlara ayrılmış olan proteinler nitroselüloz, PVDF veya naylon membran gibi katı bir desteğe transfer edilir, proteinler membran yüzeyine bağlanır ve her protein için bir bant meydana gelir.
- Bloklama, membran üzerinde açıkta kalan alanlar spesifik olmayan antikor bağlantısını engellemek için genellikle serum veya süt proteinleri için bloklama solüsyonları ile bloke edilir. Bu, arka planda istenmeyen bağlanmaları önler.
- Hedef Proteinin İşaretlenmesi, membran hedef proteine özgü birincil antikor ile inkübe edilir, antikorlar hedeflenen proteinlere bağlanır, ardından antijen- birincil antikor kompleksini görselleştirmek için membran birincil antikora spesifik, bir enzimle konjuge ya da radyoaktif işaretli ikincil antikor ile inkübe edilir. Bu aşama, hedef proteinin tespit edilmesi için kritik öneme sahiptir.
- Görüntüleme, son aşamada ise ikincil antikora konjuge enzimle reaksiyona girerek renkli bir ürün oluşturan ya da ışıldayan substrat eklenir ve kolorimetrik tanımlama, kemilüminesan tanımlama veya floresan tanımlama yöntemlerinden uygun olanı kullanılarak hedef protein görüntülenir.
Mishra M, Tiwari S, Gomes AV. Protein purification and analysis: next generation Western blotting techniques. Expert Review of Proteomics. 2017 Nov;14(11):1037-1053. DOI: 10.1080/14789450.2017.1388167. PMID: 28974114; PMCID: PMC6810642.