Hücre Kültürü Analizlerimiz

HÜCRE KÜLTÜRÜ UYGULAMALARIMIZ

Hücre kültürü, bir organizmadan izole edilen hücrelerin, vücut dışındaki (in vitro) yapay ortamlarda, aseptik teknikler uygulanarak uygun koşullar sağlanarak yaşatılması ve çoğaltılması işlemidir. Hücre kültürü uygulamaları yapılırken kontaminasyonu önlemek amacıyla Sınıf II Biyogüvenlik Kabinleri (BSC) kullanılmaktadır. Böylelikle hücrelerin doğal ortamları in vitro ortamda taklit edilerek sağlanır.

Hücre kültürü sistemleri, birincil dokulardan izole edilen hücrelerin in vitro koşullarda pasajlanarak (alt kültürleme) biyolojik sürekliliği ve tekrarlanabilir veriler elde edilmesini sağlar. Hayvan modelleri ile kıyaslandığında, hücre kültürü çalışmaları; yüksek maliyetli hayvan bakımı, etik kurul onay süreçleri ve uzun süreli deney protokollerine duyulan ihtiyacı ortadan kaldırarak çok daha ekonomik bir çözüm sunmaktadır. Özellikle ilaç tarama ve toksisite testlerinde, geniş ölçekli analizlerin (high‑throughput screening) düşük maliyetle ve kısa sürede gerçekleştirilmesine imkân tanıyan bu teknik, laboratuvar verimliliğini maksimize eden temel bir araştırma aracıdır. Bununla birlikte, spesifik hücre hatlarının karakterizasyonu, bazı özelleşmiş hücre hatlarının temini, kullanılan hücre tipinin nadirliği veya seçilen analiz kitlerinin özelliği ve yüksek hassasiyetleri gibi faktörlerin, birim maliyet üzerinde değişkenlik yaratabileceği göz önünde bulundurulmalıdır.

Hücre kültüründe başlıca uygulanabilecek testler;

• İlaç Geliştirme ve Toksisite Testleri

Yeni sentezlenen bir kimyasalın veya bitkisel ekstraktın canlılar üzerindeki sitotoksisitesini test etmek amacıyla kullanılmaktadır. Test edilecek olan materyalin sitotoksisite ve doz‑yanıt ilişkisi ile alakalı sonuçlar vermektedir. Bu analizler, ile test edilecek olan materyalin etkinliğini ve güvenirliğini standardize etmek için çok önemlidir. 96 veya 384 kuyucuklu plakalar kullanılarak aynı anda çok sayıda farklı bileşiğin taraması yapılabilmektedir.

Metabolik Aktivite Testleri (Örn: MTT, XTT): Hücrelerin mitokondriyal dehidrojenaz enzim aktivitesini ölçerek canlı hücre sayısını kantitatif olarak belirler. Hücresel aktiviteyi veya canlılığı %50 oranında inhibe eden IC50 veya maksimum etkinin yarısını oluşturan EC50 konsantrasyon değerlerinin belirlenmesi sağlanarak test edilcek materyalin potansiyel toksisitesi belirlenir.

Checkerboard microplate assay: Hücre hatlarında iki farklı test edilecek olan materyalin kombinasyonel sitotoksik etkilerinin doğasını değerlendirmek için checkerboard testi kullanılmakadır.

• Hücre Kültürü Tabanlı ELISA Uygulamaları

Hücre kültürü ortamından elde edilen sıvıların (süpernatant) veya hücre lizatlarının biyokimyasal analizleri yapılmaktadır. Bir ilaç adayının veya genetik modifikasyonun (örneğin bir genin susturulması) hücrenin salgı profilini nasıl değiştirdiğini ELISA ile belirlenmektedir. İnflamasyon çalışmaları, anjiyogenez (damarlanma) testleri ve protein ekspresyonu gibi çeşitli çalışmalar için kullanılmaktadır.

• Proliferasyon ve Migrasyon (Yara İyileşmesi) Deneyleri

Özellikle kanser hücre hatlarının laboratuvarda çoğaltılarak kanserin yayılma mekanizmaları ve kemoterapi ilaçlarına verdikleri yanıtlar incelenmektedir. Kanser hücrelerinin invazyon kapasitesini ölçmek için yapılan Scratch Assay (Çizik deneyi) veya Transwell Migration testleri ile hücre hareketliliğinin belirlenmesi sağlanmaktadır. Ayrıca kanser hücrelerinin tümörijenik potansiyellerini tespit etmek amacıyla malign tümör hücrelerinin substrata tutunma, bağımsız büyüme ve uzun vadeli proliferasyon kapasitesini değerlendirmek için 3D yumuşak agar koloni (Soft agar colony formation) oluşturma testleri yapılmaktadır.

• Genetik Mühendisliği ve Transfeksiyon Teknolojileri

Moleküler biyoloji uygulamalarımızın temelini oluşturan transfeksiyon, viral olmayan yöntemler kullanılarak yabancı nükleik asitlerin (DNA veya RNA) ökaryotik hücrelere kontrollü bir şekilde aktarılması işlemidir. Bu teknoloji, hücreyi bir "biyoreaktör" gibi kullanarak hedef proteinlerin ekspresyonunu sağlar veya genetik dizilimde kalıcı değişiklikler yapmamıza olanak tanır.

• Kök Hücre Teknolojileri

Kök hücreler, farklılaşma potansiyellerine göre sınıflandırılarak (Mezenkimal veya iPSC) laboratuvar ortamında özelleşmiş dokulara dönüştürülürmektedir. Bu süreçte hücre, besiyerine eklenen spesifik büyüme faktörleri gibi kimyasal uyaranlar ve büyüme yüzeyinin sertliği gibi mekanik faktörlerin optimize edildiği in vitro koşullarda; kas, sinir veya kemik gibi fonksiyonel hücre tiplerinin eldesi sağlanır.