PCR Numune Alım Prosedürü

Doku Numune Alım Prosedürü

Kullanılacak tüm aletlerin (bistüri, pens, vb.) steril olmalıdır. Mümkünse tek kullanımlık aletler tercih edilmelidir.

Çalışma alanı ve yüzeyi çalışmaya başlamadan önce uygun sterilizasyon yöntemleri ile temizlenmeli, sterilize edilmelidir.

Çalışma sırasında eldiven kullanmak, önlük giymek gibi steril tekniklere dikkat etmek gerekmektedir aksi takdirde DNA‑RNA kontaminasyonu kaynaklı yanlış pozitif sonuçlar alınmaktadır.

Doku örneklerini işlerken, çalışmayı mümkünse buz üzerinde yapmanız önerilir. Bu, doku örneklerinin bozulmasını ve proteinlerin degradasyonunu önlemeye yardımcı olur. Yıkama ve diğer işlemleri hızlı bir şekilde gerçekleştirmek, doku örneklerinin kalitesini korumak açısından kritik öneme sahiptir.

1. Hedef doku temiz, mümkünse tek kullanımlık aletler ile ayırılır.
2. Doku örneği soğuk 1X PBS ile kısa bir süre yıkanır.

Bu aşama dokuda bulunan kanı uzaklaştırmak için gerekmektedir ancak oldukça dikkatli ve hızlı olunmalıdır.

1. Doku alındıktan hemen sonra, doku örneği buz üzerinde daha küçük parçalara kesilir, önceden etiketlenmiş, temiz eppendorf tüplere koyulur ve sıvı nitrojene daldırıp anında dondurun.

Eğer sıvı nitrojen erişiminiz yoksa, ‑80°C’de saklamak da yeterli bir alternatiftir.

*Çalışma için 0.1 g doku yeterli olmaktadır.

1. Örnekler daha sonra kullanmak için ‑80°C'de saklanmalıdır.

Numunelerin Transferi:

Numuneleriniz uygun koşullarda şirketimiz tarafından transfer edilecektir. Şirketimiz numunelerin transferini 78.5°C sağlayan kurubuz ile yapmaktadır.

Hücre Kültürü Numune Alım Prosedürü

Adherent Hücreler İçin

Hücreler %80 yoğunluğa ulaşınca toplanmalıdır.

Çalışma alanı, yüzeyi ve kullanılacak aletler çalışmaya başlamadan önce uygun sterilizasyon yöntemleri ile temizlenmeli ve steril hale getirilmelidir (alkol ile silme).

Çalışma sırasında eldiven kullanmak, önlük giymek gibi steril tekniklere dikkat etmek gerekmektedir aksi takdirde DNA‑RNA kontaminasyonu kaynaklı yanlış pozitif sonuçlar alınmaktadır.

Çalışmayı mümkünse buz üzerinde yapmanız önerilmektedir.

Çalışmaya başlamadan önce santrifüj 4 °C’ye soğutulmalıdır.

1. Hücrelerin ekili olduğu petri kabı / flask buz üzerine yerleştirilir.
2. Hücrelerin üzerindeki besiyeri dikkatlice aspire edilir.
3. Hücreler, besiyeri kalıntılarını uzaklaştırmak için soğuk 1X PBS ile yıkanır ve ardından PBS aspire edilir.

*PBS eklenirken dikkatli olunmalıdır. PBS yavaşça, hücreleri kaldırmamaya dikkat ederek eklenmeli ve dikkatlice karıştırılmalıdır. (Besiyeri hacmine eşit hacimde soğuk PBS kullanılabilir)

1. Yıkama işlemi 2 kere tekrar edilir.
2. Yıkama işlemi sonrası hücrelerin üzerine hücreleri toplamak için soğuk lizis tamponu eklenir ve buz üzerinde 5 dk inkübe edilir.
3. İnkübasyon ardından steril hücre kazıyıcı veya pipet ucu kullanarak hücreler sıyırılır, pipetle yavaşça karıştırarak hücreler toplanır ve mikrosantrifüj tüpü içerisine koyulur.
4. Tüpler 10.000 G, 4 °C’de 10 dk santrifüj edilir.

*Kullanılan tampona veya kite göre santrifüj değerleri değişim gösterebilmektedir.

1. Santrifüj sonrası üstteki süpernatant dikkatlice yeni ve temiz bir tüpe aktarılır ve buza gömülür. Süpernatant DNA – RNA içermektedir.
2. Örnekler daha sonra kullanmak için ‑80°C'de saklanmalıdır.

Numunelerin Transferi:

Numuneleriniz uygun koşullarda şirketimiz tarafından transfer edilecektir. Şirketimiz numunelerin transferini 78.5°C sağlayan kurubuz ile yapmaktadır.

Süspanse Hücre Numune Alım Prosedürü

Hücreler %80 yoğunluğa ulaşınca toplanmalıdır.

Çalışma alanı, yüzeyi ve kullanılacak aletler çalışmaya başlamadan önce uygun sterilizasyon yöntemleri ile temizlenmeli ve steril hale getirilmelidir (alkol ile silme).

Çalışma sırasında eldiven kullanmak, önlük giymek gibi steril tekniklere dikkat etmek gerekmektedir aksi takdirde DNA‑RNA kontaminasyonu kaynaklı yanlış pozitif sonuçlar alınmaktadır.

Çalışmayı mümkünse buz üzerinde yapmanız önerilmektedir.

Çalışmaya başlamadan önce santrifüj 4 °C’ye soğutulmalıdır.

1. Hücrelerin ekili olduğu flask / petri kabı buz üzerine yerleştirilir.
2. Hücre süspansiyonu bol pipetaj yapılarak toplanır ve falkon tüpe aktarılır.

*Bu aşamada flask yüzeyinde bulunan tüm hücreler toplanmaya çalışılmalıdır.

1. Falkon santrifüje yerleştirilir ve 4 °C 2500G’de 5‑10 dk santrifüj edilir.
2. Santrifüj işlemi sonrası hücreler tüpün dibinde toplanacaktır (pellet) üstteki sıvı pellete dokunmamaya çalışarak dikkatlice atılır.

*Hücre pasajlama protokolünde uygulanılan süre ve RPM’de santrifüj işlemini gerçekleştirilebilir.

1. Test tüpü buz üzerine yerleştirilir, pellet soğuk PBS ile yeniden süspanse edilerek bir kez yıkanır.
2. Süspanse hücreler 4 °C 2.500G’de 5‑10 dk santrifuj edilir ve üstte bulunan sıvıyı atılır.
3. Test tüpü buz üzerine yerleştirilir, pellet üzerine lizis tamponu eklenir ve yukarı aşağı pipetaj yaparak hücreleri tekrar süspanse hale getirilir.
4. Hücre süspansiyonunu buz üzerinde 5‑10 dk bekletilir, hücrelerin parçalanması için ara ara çalkalanır.

*İnkübasyon süresi kullanılan lizis tamponuna bağlı olarak değişebilmektedir.

1. İnkübasyon süresi ardından hücre süspansiyonunu 4°C'de 10.000 G'de 10 dk santrifüjlenir.

*Kullanılan tampona veya kite göre santrifüj değerleri değişim gösterebilmektedir.

1. Santrifüj sonrası üstteki süpernatant dikkatlice yeni ve temiz bir tüpe aktarılır ve buza gömülür. Süpernatant DNA – RNA içermektedir.
2. Örnekler daha sonra kullanmak için ‑80°C'de saklanmalıdır.

Numunelerin Transferi:

Numuneleriniz uygun koşullarda şirketimiz tarafından transfer edilecektir. Şirketimiz numunelerin transferini 78.5°C sağlayan kurubuz ile yapmaktadır.