I.H.C. Numune Alım Prosedürü

Numune Alınmadan Önce:

• • Deney hayvanına doku, graft, tümör, kök hücre vs. yerleştirilecekse yara bölgesi çözünmeyen sütür ile dört köşesinden işaretlenmelidir.
  • Bu prosedür doku çıkartılırken hedef alanın bulunmasını ve x‑y‑z düzlemlerinde konumunun tespitini sağlayacaktır.
  • İşaretlenme yapılırken mümkün olan en küçük alan tercih edilmelidir. Alanın küçük olması: 1‑Bloklanacak kasetin boyutunun standart olmasından; 2‑ Fiksatifin dokuya penetre olabilmesi için ideal doku boyutunun 1x1x1 cm yani 1 cm^3 olmasındandır.

Numune Alındıktan Sonra:

• • Doku çıkartıldıktan sonra hedef alanın etrafındaki tüm fazla dokuların büyüteç altında küçültülmesi üstteki sebeplerden dolayı gereklidir. Fare beyni, karaciğeri vb. küçük organlar yaklaşık 1 cm^3 boyutunda olduklarından küçültülmeye ihtiyaç duymadan fiksatife konulabilir. Mide, bağırsak gibi boşluklu organların içine fiksatifin girmesi için organın yapısı bozulmadan bir‑iki noktadan delinmesi gerekmektedir. Bu işlemler sırasında doku PBS, serum fizyolojik gibi bir sıvı kullanılarak kurumasına izin verilmemelidir.
  • Küçültme işlemi sırasında kullanılacak kesici materyal NEŞTER (SCALPEL) ya da TEK KULLANIMLIK TRAŞ JİLETLERİ olmalıdır. Diğer kesici materyaller yeteri kadar keskin olmadığından dokunun yapısının bozulmasına sebep olur. Kesme/küçültme işlemi tek seferde yapılmalıdır.
  • Dokular küçültüldükten sonra kesit alınması istenen yüzey belirlenerek işaretlenmelidir.
  • Kullanılacak fiksatif, %10’luk NBF (Neutral Buffered Formalin) olmalıdır.
  • Tamponlu formalin pH dengesini koruyarak daha kaliteli sonuçlar elde edilmesini sağlar.
  • İmmünohistokimya veya floresan çalışmalarında %10’luk NBF kullanılabilmekle birlikte daha kaliteli antijen korunumu için %4’lük PFA (paraformaldehit) tercih edilebilir.
  • Trikrom gibi özel boyalar yapılacaksa fiksatif değişeceğinden öncesinde şirketimizden bilgi alınması gerekmektedir.
  • Uygun olmayan fiksatiflerin kullanımı dokunun ve alınacak sonucun kalitesini etkiler.
  • Fiksatif doku parçasının ortalama 10 katı hacminde olmalıdır.
  • Doku alındıktan sonraki gün fiksatif yenilenmelidir.
  • Küçük doku örneklerinde, çoğu rutin histolojik inceleme için 12‑24 saatlik fiksasyon yeterli olabilmektedir. Ancak uygun fiksasyon süresi; doku tipi boyutu, yoğunluğu, yağ oranı ve yapılacak analize göre değişmektedir.
  • Sinir sistemi dokularında mutlaka tamponlu fiksatifler tercih edilmelidir. Özellikle beyin gibi yağ oranı yüksek dokularda uzun süreli fiksasyon doku sertliğini arttırabilir.
  • Uzun süreli fiksasyon özellikle immünohistokimyasal çalışmalarda antijen maskelenmesine neden olabilmektedir.
  • Embriyo, yeni doğmuş veya küçük hayvanlar veya büyü hacimli dokularda fiksatif penetrasyonunu arttırmak amacıyla örneğin iç bölgelerine enjektör yardımıyla fiksatif uygulanabilir.
  • Dokular ve fiksatif aşağıdaki örnek resimde görülen sızdırmaz kapaklı kutulara konularak taşınmalıdır. Kapaklı kutular üzerine hastanın adı/hayvanın cinsi, dokunun adı, alındığı tarih, protokol numarası kabın üzerine kurşun kalemle yazılmalıdır.
  • Retrospektif çalışma planlanıyorsa patoloji arşivinden alınan bloklar şirketimize teslim edilerek çalışma gerçekleştirilebilir.
  • Fiksasyon işlemi ve süresi belirtilen kurallara uygun olarak GERÇEKLEŞTİRİLMEZSE histolojik, histokimyasal ve immünohistokimyasal sonuçların kalitesi garanti edilemez.

Numunelerin Transferi:

• • Numuneleriniz uygun koşullarda şirketimiz tarafından transfer edilecektir.

Hücre kültürü numuneleri için:

• • Hücre kültüründe immünofloresan yada immünperoksidaz boyanma planlanıyorsa uygun chamber slide lara hücreler ekilip deney uygulandıktan sonra, uygun fiksatifle (bu konuda şirketetimize danışılmalıdır!) tespit edildikten sonra kuru buz da şirketimize ulaştırılmalıdır.

İmmünofloresan ve immünperoksidaz işaretlemeler için kullanılacak antikorlar:

• • Primer ve sekonder antikorlar dokuya, doku alınan canlıya ve birbirlerine uyumlu olmaları açısından firmamızın uzman ekibi tarafından seçilerek uygulanacaktır.
  • Primer ve sekonder antikorlar hizmet alıcı tarafından belirlenip alındıktan sonra yapılacak işaretlemelerde sonuç garanti edilemez.