I.H.C. Numune Alım Prosedürü

Numune Alınmadan Önce:

• Deney hayvanına doku, graft, tümör, kök hücre vs. yerleştirilecekse yerleştirilen alan erimeyen sütür ipiyle dört köşesinden işaretlenmelidir.
• Bu prosedür doku çıkartılırken bulunmasını ve x‑y‑z düzlemlerinde konumunun tespitini saplayacaktır.
• İşaretlenme yapılırken alanın olabilecek en küçük boyutta olmasına dikkat edilmelidir. Alanın küçük olması: 1‑Bloklanacak kasetin boyutunun standart olmasından; 2‑Fiksasyon solüsyonunun dokuya girip işini yapabilmesi için ideal doku boyutun 1x1x1 cm yani 1 cm3 olmasındandır.

Numune Alındıktan Sonra:

• Doku çıkartıldıktan sonra hedef alanın etrafındaki tüm fazladan dokular büyüteç altında küçültülmesi üstteki sebeplerden dolayı gereklidir. Fare beyni, karaciğeri vs. gibi küçük organlar 1 cm3 e yakın olduğundan küçültülmeye ihtiyaç duymadan fiksatife konulabilir. Mide, barsak gibi boşluklu organların içine fiksatifin girmesi için organın yapısı bozulmadan bir‑iki noktadan delinmesi gerekmektedir. Bu işlemler sırasında doku PBS, serum fizyolojik gibi bir sıvı kullanılarak kurumasına izin verilmemelidir.
• Küçültme işlemi sırasında kullanılacak kesici materyal NEŞTER (SCALPEL) yada TEK KULLANIMLIK TRAŞ JİLETLERİ olmalıdır. Diğer kesici materyaller yeteri kadar keskin olmadığından dokunun yapısının bozulmasına sebep olur. Kesme/küçültme işlemi tek darbede yapılmalıdır.
• Dokular küçültüldükten sonra kesit alınması istenen yüzey belirlenerek işaretlenmelidir.

Kullanılacak fiksatif TAMPONLU FORMALİN olmalıdır.

• Başka fiksatif kullanımı dokunun ve alınacak sonucun kalitesini etkiler.
• Trikrom gibi özel boyalar yapılacaksa fiksatif değişeceğinden öncesinde şirketimizden bilgi alınması gerekmektedir.
• Fiksatif doku parçasının ortalama 20 katı hacminde olmalıdır.
• Doku alındıktan sonraki gün fiksatif yenilenmelidir.
• Doku fiksatifte maksimum 5 gün durabilir. Bu süre içerisinde tarafımıza ulaştırılmalıdır aksi takdirde doku sertleşerek kesilemez hale gelir.
• Fiksasyon süresi yağ oranı yüksek olan beyin vs. gibi dokularda daha kısa olduğu unutulmamalıdır.
• Dokular ve fiksatif aşağıdaki örnek resimde görülen sızdırmaz kapaklı kutulara konularak taşınmalıdır. Kapaklı kutular üzerine hastanın adı/hayvanın cinsi, dokunun adı, alındığı tarih, protokol numarası kabın üzerine kurşun kalemle yazılmalıdır.
• Retrospektif çalışma planlanıyorsa patoloji arşivinden alınan bloklar şirketimize teslim edilerek çalışma gerçekleştirilebilir.
• Fiksasyon işlemi ve süresi belirtilen kurallara uygun GERÇEKLEŞMEZSE sonuç alınması garanti edilemez.

Numunelerin Transferi:

• Numuneleriniz uygun koşullarda şirketimiz tarafından transfer edilecektir.

Hücre kültürü numuneleri için:

• Hücre kültüründe immünofloresan yada immünperoksidaz boyanma planlanıyorsa uygun chamber slide lara hücreler ekilip deney uygulandıktan sonra, uygun fiksatifle (bu konuda şirketetimize danışılmalıdır!) tespit edildikten sonra kuru buz da şirketimize ulaştırılmalıdır.

İmmünofloresan ve immünperoksidaz işaretlemeler için kullanılacak antikorlar:

• Primer ve sekonder antikorlar dokuya, doku alınan canlıya ve birbirlerine uyumlu olmaları açısından firmamızın uzman ekibi tarafından seçilerek uygulanacaktır.
• Primer ve sekonder antikorlar hizmet alıcı tarafından belirlenip alındıktan sonra yapılacak işaretlemelerde sonuç garanti edilemez.