Real Time PCR Analizleri

Gerçek Zamanlı PCR hizmetimiz sayesinde sizlere son teknoloji cihazlarımız ile deneyimli ekibimiz tarafından her aşamada titizlikle çalışılmış hızlı ve güvenilir sonuçları sunmaktayız. Sizde qPCR hizmetimizle hızlı ve güvenilir veriler elde ederek bilimsel sonuçlarınızı güçlendirebilirsiniz.

Gerçek zamanlı PCR, DNA veya RNA'nın miktarını amplifikasyon süreci boyunca izlemeye olanak tanıyan bir moleküler biyoloji tekniğidir. Gerçek zamanlı PCR, geleneksel PCR yöntemine kıyasla amplifikasyonun her aşamasında hedef DNA'nın miktarını izleme imkanı sunmaktadır. Gerçek zamanlı PCR, gen ekspresyonunu nicel olarak analiz etmek ve belirli DNA veya RNA dizilerini tespit etmek için kullanılan son derece hassas bir yöntemdir. Yüksek hassasiyeti ve spesifisitesi sayesinde araştırmalarda vazgeçilmez bir araç haline gelen bu yöntem gen ekspresyon analizi, genetik varyasyonların incelenmesi, biyomarker keşfi, patojen tespiti ve genetik araştırmalar gibi birçok farklı uygulamada yaygın olarak kullanılmaktadır. Kanser araştırmalarında, temel biyoloji araştırmalarında, biyoteknoloji ve genetik araştırmalarında yaygın olarak kullanılmakta olan Gerçek Zamanlı PCR, sağladığı hızlı, hassas ve güvenilir sonuçlar sayesinde, temel biyolojik araştırmalardan klinik araştırmalarakadar birçok farklı alanda kritik rol oynamaktadır. Bu teknoloji, bilim insanlarına genetik materyali daha iyi anlamak ve çeşitli uygulamalarda kullanmak için güçlü bir araç sunmaktadır.

Gerçek Zamanlı PCR (qPCR) 5 temel prensipten oluşmaktadır;

1‑ Denatürasyon: DNA çift sarmalı, yüksek sıcaklık (genellikle 95°C) altında denatüre edilir. Bu aşamada, DNA'nın iki ipliği ayrışır ve tek sarmal hale gelir.

2‑ Primer Bağlanması (Hibridizasyon): Sıcaklık, primerlerin (hedef DNA dizisini tanımlayan kısa diziler) hedef dizilere bağlanması için düşürülür (genellikle 50‑65°C). Primerler, hedef DNA’nın spesifik bölgelerine bağlanır.

3‑ Amplifikasyon (Hedef dizinin çoğaltılması): Sıcaklık, DNA polimeraz enziminin optimal çalışma sıcaklığına (genellikle 72°C) yükseltilir. Polimeraz, primerlerin bağlandığı yerden başlayarak yeni DNA ipliklerini sentezler. Bu süreç, her döngüde DNA miktarını iki katına çıkarır.

4‑ Sinyal Üretimi: Gerçek zamanlı PCR'da genellikle iki ana floresan teknolojisi kullanılır:

SYBR Green: DNA ile bağlanarak floresan sinyal üreten bir boyadır. Kullanıldığında yalnızca çift sarmal DNA ile birleşir ve amplifikasyon süresince sinyal yoğunluğu artar. Bu sinyal, hedef DNA'nın miktarını belirlemek için kullanılabilir.

TaqMan Probları: Hedef DNA dizisine bağlanan ve amplifikasyon sırasında parçalanan özel bir prob dizisidir. Hedef diziye bağlandığında floresan sinyal serbest bırakılır ve bu sinyal, spesifik hedefin miktarını belirlemek için kullanılır.

5‑ Veri Analizi: Her amplifikasyon döngüsünde elde edilen floresan sinyali ölçülür. Sinyalin belirli bir eşiği (threshold) geçtiği döngü sayısı (Ct değeri) kaydedilir. Ct değeri, başlangıçtaki hedef DNA miktarıyla ters orantılıdır; daha az DNA için daha yüksek bir Ct değeri, daha fazla DNA için ise daha düşük bir Ct değeri elde edilir.

Sizlerin memnuniyetini ön planda tutarak, çeşitli örnek türlerini analiz edebilir ve sonuçları güvenilir bir şekilde raporlayabiliriz. Sonuçlarınızı ve analiz bilgilerinizi kolayca erişebileceğiniz bir platform üzerinden sunarak, karar verme süreçlerinizi hızlandırıyoruz. Kullanıcı dostu arayüzümüz sayesinde, bilgiye ve sonuçlara anında ulaşabilir, projelerinizi etkin bir şekilde yönetebilirsiniz. Siz de qPCR hizmetlerimizden faydalanarak, araştırmalarınızda yeni ufuklar açabilir ve sonuçlarınızı en üst düzeye çıkarabilirsiniz.

Uygulamalarımız

Gen Ekspresyon Analizi: Gerçek zamanlı PCR (qPCR) gen ekspresyon analizi için sıklıkla kullanılmaktadır. Bu teknik, DNA'nın amplifikasyonunu gerçek zamanlı olarak izleyerek, belirli genlerin ekspresyon seviyelerini ölçmeyi sağlar. Her döngüde floresan sinyalin artışı, gen kopyalarının miktarını gösterir. Bu yöntem, gen ekspresyonundaki değişiklikleri hassas bir şekilde tespit etmek için idealdir ve genellikle referans genlerle karşılaştırılarak sonuçlar analiz edilmektedir. Kanser araştırmalarında, ilaç geliştirme çalışmalarında, genetik araştırmalarda, biyomarker / biyobelirteç araştırmalarında, gen ekspresyon analizi yaygın olarak kullanılmaktadır.

miRNA Ekspresyon Analizi: mikro RNA'ların (miRNA) hücrelerde veya dokulardaki seviyelerinin belirlenmesi sürecidir. miRNA'lar, gen ekspresyonunu post‑transkripsiyonel olarak düzenleyen küçük, tek sarmallı RNA molekülleridir. Bu analiz, genellikle qPCR, microarray veya RNA‑seq yöntemleriyle yapılır ve kanser, kardiyovasküler hastalıklar ve nörolojik bozukluklar gibi birçok hastalıkta miRNA'nın rolünü anlamak için kullanılır. miRNA profillemesi, potansiyel biyomarkerlerin keşfi ve tedavi stratejilerinin geliştirilmesinde önemli bir araçtır.

Telomer Uzunluk Analizi: qPCR ile telomer uzunluk analizi, hücrelerdeki telomerlerin (kromozomların uç kısımlarını koruyan DNA yapıları) uzunluğunu belirlemek için kullanılan bir yöntemdir. Telomer uzunluğu, hücre yaşlanması, kanser ve diğer hastalıkların göstergesi olarak önemli bir biyomarker olarak kabul edilir.

Metilasyon Analizi: Metilasyon analizi, DNA'nın metil gruplarının belirli bölgelerdeki varlığını veya yokluğunu tespit etmek için yapılan bir süreçtir. qPCR, bu analizi gerçekleştirmek için etkili bir yöntemdir.

Hidroliz ve Hibridizasyon Prob Temelli qPCR: DNA amplifikasyonunu ve spesifik varyantların tespitini sağlamak için kullanılan iki farklı yöntemdir. Hibridizasyon probu, hedef DNA dizisine spesifik olarak bağlanan bir oligonükleotid probudur. Genellikle, bir floresan boya ile işaretlenmiş ve spesifik bir hedef diziye bağlanan bir prob kullanılır. Hidroliz probu, DNA’nın tamamına değil de hedeflenen bölgeye bağlanarak ışıma yapan, bir floresan boya ve bir quenchere (sinyali azaltan molekül) sahiptir. Probların kullanılmasında amaç seçilen bölge içerisinde ki tamamlayacı dizinin varlığını belirlemektir.

Varyant Tespiti (mutasyon, SNP ve diğer poliorfizmler): DNA'daki belirli mutasyonların, SNP'lerin (tek nükleotid polimorfizmlerin) ve diğer genetik varyasyonların hızlı ve hassas bir şekilde tespit edilmesi için kullanılan bir tekniktir. Bu yöntemde, belirli bir genetik bölgedeki varyantlar, spesifik primerler ve prob kullanılarak amplifiye edilir. qPCR, amplifikasyon sürecini gerçek zamanlı olarak izler ve hedef varyantın varlığına dair sinyal verir. Bu sayede, genetik hastalık çalışmaları, mutasyonların analizi ve popülasyon genetiği gibi birçok alanda uygulanabilir.